本发明公开了一种从薯类淀粉加工废液中提取蛋白的方法。该方法包括下述步骤:1)将薯类淀粉加工废液离心,使废液中淀粉含量降低到0.17%及以下,得到薯类蛋白液;2)将所述薯类蛋白液预热至45-55°C,然后在蒸汽的作用下加热至不低于80°C,使薯类蛋白受热凝集成絮状物,冷却,得到薯类蛋白悬浮液;3)使所述薯类蛋白悬浮液中的絮状蛋白和清液分离,得到蛋白。所获得的薯类蛋白纯度高、杂质少,加工中不添加任何化学物质,食用安全可靠。该法回收了残留在废液中的薯类淀粉,并完成了薯类淀粉加工废液的分离、提取,实现薯类淀粉加工废弃物的综合利用,增加产品附加值。同时采用目前市场已有的食品机械生产薯类蛋白,提取工艺简单、易操作,且易于工厂化生产。
1.一种从薯类淀粉加工废液中提取蛋白的方法,包括下述步骤:1)将薯类淀粉加工废液离心,使废液中淀粉含量降低到0.17%及以下,得到蛋白液;2)将所述蛋白液预热,然后在蒸汽的作用下加热至不低于80°C,使蛋白受热凝集成絮状物,冷却,得到蛋白悬浮液;3)使所述蛋白悬浮液中的絮状蛋白和清液分离,得到蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤1)所述废液中的淀粉含量为0.11%-0.17%。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤1)中所述离心是在卧式螺旋离心机中进行的,所述离心采用的离心力大于等于1800g,优选2400g-4000g。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法,其特征在于:步骤2)中将所述蛋白液预热至45-55°C,然后在蒸汽的作用下加热至80-100°C;步骤2)中所述预热是在板式换热器中进行的。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法,其特征在于:步骤3)中使所述蛋白悬浮液中的絮状蛋白和清液分离的方法选自下述任意一种:1)离心、2)通过80目及以上的筛网过滤筛分、3)静置沉降。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:所述离心是在卧式螺旋离心机中进行的,离心力为2000g-4000g;所述清液中的蛋白含量不高于0.109%优选
0.076-0.109%。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法,其特征在于:所述方法还包括对步骤3)得到的蛋白进行干燥,使其水分含量控制在10%以下的步骤;所述干燥的方式选自下述至少一种:喷雾干燥、气流干燥、鼓风干燥、滚筒干燥和闪蒸干燥。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法,其特征在于:所述步骤1)还包括回收废液中的淀粉。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法,其特征在于:所述淀粉加工废液是将甘薯清洗、磋磨、粉碎,并经提取淀粉后得到的。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法,其特征在于:所述薯类选自下述任意一种:甘薯、马铃薯和木薯。技术领域
本发明涉及一种从薯类淀粉加工废液中提取蛋白的方法。
背景技术
我国是世界上最大的甘薯生产国,据FAO统计数据显示,2008年世界甘薯总产量11012.8万吨,其中,中国甘薯产量8521.3万吨,占世界甘薯总产量的78.28%。甘薯中淀粉含量占干物质总量的70%左右,在我国,淀粉是甘薯加工的主要产品,也是很多工业生产的原料,而甘薯淀粉生产中的废液问题一直是困扰我国甘薯加工企业的难题。由淀粉加工车间排放出的废液中富含蛋白质,这为那些依赖氮生长和维持活性的污水微生物提供了营养元素,激发了蛋白质的分解过程,产生大量具有强烈气味的挥发性气体物质,降低了周边的空气质量,同时水中的氧为满足微生物生长需氧量(BOD)而消耗殆尽,引起鱼的窒息、鱼类天然食物的死亡以及河流生态学的紊乱。甘薯蛋白含有丰富的氨基酸,其氨基酸组成模式符合WHO/FAO推荐标准,必需氨基酸含量很高,是其它植物蛋白所无法比拟的。甘薯蛋白的生物价值很高,它的营养价值可与牛奶、肉类媲美。甘薯蛋白除了基本的营养功能外,还有其它一些保健功能,如:抗氧化活性,降血糖活性,抗糖尿病功效,增强免疫调节作用,降血脂作用,抗癌等功效。因此,开发从甘薯淀粉加工废液中提取蛋白的技术对于甘薯蛋白在食品工业和医疗保健行业中的应用具有积极的意义。尽管国内有一些对甘薯和马铃薯蛋白提取方法的专利和报道,但主要提取工艺是在实验室内进行,工艺相对比较复杂,难以进行产业化推广。《从马铃薯淀粉加工废液中提取蛋白质的方法》(CNxa0101220078B,2010.06.02)中提及采用加热法提取马铃薯蛋白,但对于淀粉加工废液中残存的淀粉,未见有相关回收措施,在调节pH值时加入大量的HCl也难于工业化生产,且严重影响蛋白产品的质量,另外对于提取蛋白的具体设备及参数也未提及。日本有加热回收变性蛋白的专利(CN85103901A),但也只涉及将淀粉加工废液整体在池中加热,然后自然沉降,这种方法在大规模工业化生产的现代淀粉加工企业中难以进行推广。国内也有部分学者利用有机溶剂(乙醚、丙酮)反复提取过滤,再用水提取和乙醇沉淀等步骤提取蛋白质含量约10%左右,分子量为62000的甘薯糖蛋白(李亚娜等,2003)。然而,乙醚、丙酮、氯仿和正丁醇均含有不同程度的毒性,不适用于食品工业化生产,而且该法提取步骤繁琐,很难满足食品企业对产品投资少、效益大的要求。
发明内容
本发明的目的是提供一种从薯类淀粉加工废液中提取蛋白的方法。本发明以薯类淀粉加工废液为材料,先通过一种物理离心的方法快速简便地回收薯类淀粉,减少薯类淀粉加工废液中固形物的含量,然后利用相应的食品加工设备提取薯类蛋白。该提取薯类蛋白的方法简单,蛋白提取率和纯度较高、杂质少,能应用于大规模工业化生产。本发明所提供的从薯类淀粉加工废液中提取蛋白的方法,包括以下步骤:1)将薯类淀粉加工废液离心,使废液中淀粉含量降低到0.17%及以下,得到薯类蛋白液;2)将所述薯类蛋白液预热至45-55°C,然后在蒸汽的作用下加热至不低于80°C(优选80-100°C),使薯类蛋白受热凝集成絮状物,冷却,得到薯类蛋白悬浮液;3)使所述薯类蛋白悬浮液中的絮状蛋白和清液分离,得到薯类蛋白。其中,步骤1)中所述离心操作是在卧式螺旋离心机中进行的,离心力大于等于1800g,优选2400g-4000g。残留于废液中的淀粉经离心后回收,废液中残留淀粉含量可降低至0.11%-0.17%,回收的淀粉经脱水、干燥得到粗淀粉产品,如需精制,可再次通过淀粉洗涤单元设备进行精制。步骤2)中所述预热是在板式换热器中进行的。薯类蛋白液通过选料泵泵入预热设备(板式热交换器)中,瞬间加热至50±5°C左右;预热后的蛋白液置于储藏罐内并在高温蒸汽的作用下被瞬间加热至80-100°C,蛋白受热凝集成絮状物。步骤3)中使所述薯类蛋白悬浮液中的絮状蛋白和清液分离的方法选自下述任意一种:1)离心,2)通过80目及以上的筛网过滤筛分,3)静置沉降。若选择离心分离,所述离心操作可在卧式螺旋离心机中进行,离心力大于等于1800g,优选2400g-4000g。所述清液中的蛋白含量不高于0.109%,优选0.076-0.109%。本发明的方法还包括对步骤3)得到的薯类蛋白进行干燥,使其水分含量控制在10%以下的步骤。所述干燥的方式选自下述至少一种:喷雾干燥、气流干燥、鼓风干燥、滚筒干燥和闪蒸干燥。本发明中所述薯类选自下述任意一种:甘薯、马铃薯和木薯。本发明所用的薯类淀粉加工废液是将甘薯清洗、磋磨、粉碎,并经提取淀粉后得到的。采用本发明的方法,以“商薯98”生产甘薯淀粉所产生的废液为原料提取甘薯蛋白,所得甘薯蛋白提取率为71.25%,纯度达60.49%。本发明的方法具有以下优点:1、实现从甘薯淀粉加工废液中分离、提取蛋白质的产业化,同时回收残留在废液中的甘薯淀粉,实现甘薯淀粉加工废弃物的综合利用,增加产品附加值;2、蛋白提取过程中未添加任何化学成分,通过热处理能得到高品质和高纯度的甘薯蛋白,可以直接用作食品添加剂和饲料;3、采用目前市场已有的食品机械(卧螺离心机、板式换热器、蒸汽发生器、气流干燥机、喷雾干燥机等)生产甘薯蛋白,提取工艺简单、易操作、易工厂化生产;4、该方法也适用于马铃薯、木薯淀粉生产所产生的废液处理,不仅可以提高薯类加工的综合经济效益,也缓解了废液肆意排放造成的环境污染。
附图说明
图1为甘薯蛋白提取工艺流程图。图2为Lorry法测定加热后废液中剩余蛋白含量的标准曲线。图3为蛋白废液加热前后粒径变化情况。图4为测定淀粉含量时葡萄糖含量标准曲线。图5为喷雾干燥所得的甘薯蛋白粉照片。图6为鼓风干燥所得的甘薯蛋白粉照片。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明,但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法;所述试剂和材料,如无特殊说明,均可从商业途径获得。下述实施例中所用的甘薯废液是以品种为“商薯98”的甘薯生产淀粉所产生的废液。以甘薯为例,本发明方法以具体步骤依次如下:1、离心:将提取淀粉后的甘薯废液分别泵入卧螺离心机,在一定离心力的作用下(2000-3000g)最大程度地去除其中的薯渣及甘薯淀粉。2、预热:去除淀粉和薯渣的蛋白液按一定量进行加热处理,首先需要将蛋白液进行预热处理,此步骤采用比较常见且经济的板式换热器,本次操作为蒸汽加热使蛋白絮凝的基础,可以提高蛋白处理量和絮凝速度。3、蒸汽加热絮凝:蛋白液经板式换热器预热后泵入储存罐中,然后经过高温蒸汽进行加热处理,此步也可通过喷射器将预热的蛋白液经过闪蒸装置进行加热絮凝。4、二次离心:冷却后的料液在卧螺离心机中经过3000g的速度离心、浓缩甘薯蛋白沉淀。5、干燥:通过喷雾干燥、气流干燥、鼓风干燥、滚筒干燥和闪蒸干燥等方式将所得甘薯蛋白沉淀物干燥,控制水分含量在10%以下,最终得甘薯蛋白产品。实施例1、提取甘薯蛋白的工艺优化1、卧式螺旋离心机最佳运行参数探讨卧式螺旋离心机的用途是除掉甘薯废液中存在大量淀粉和大颗粒薯渣等杂质,其中淀粉是较难除去的物质,其颗粒大小介于2~40μm之间,本实验室的研究结果表明,热沉法回收蛋白过程中,离心力越高废液中残余淀粉含量越低。因此,溶液中淀粉含量作为检测离心效果的指标,并对卧式螺旋高速离心机在不同离心力(900g,1200g,1500g,1800g,2100g,2400g,2700g,3000g)条件下,探讨废液中淀粉含量变化情况。结果表明进料量为4t/h时,淀粉含量随离心力升高而降低,当离心力从900g升高到2400g时,淀粉含量下降较为明显,转速高于2400g时,下降幅度有所减缓。当离心力达到设备最高转速3000g时,溶液中淀粉含量最低,仅有0.11%。表1离心力对废液中淀粉含量影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>注:同一组内不同字母(a,b,c)表示存在显著性差异(P<0.05)。2、加热温度对沉淀效果的影响甘薯废液在2400g下离心后,探讨不同加热温度(60°C、70°C、80°C、90°C、100°C)对离心液中蛋白沉淀效果的影响。以离心后(3000g)溶液中剩余蛋白的含量为指标,分别探讨离心后不同加热温度(60°C、70°C、80°C、90°C、100°C)对离心液中蛋白沉淀效果的影响。结果表明,溶液中残余蛋白含量与离心液加热温度呈负相关,加热温度在80°C以下,各温度处理间蛋白含量呈显著性差异,高于80°C时,差异不显著,但是溶液中蛋白浓度继续下降。表2加热温度对溶液中剩余蛋白浓度的影响ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>注:同一组内不同字母(a,b,c)表示存在显著性差异(P<0.05)。3、卧螺离心机最佳运行参数探讨废液在2400g下离心后,加热产生蛋白沉淀,沉淀采用卧螺离心机分离,影响卧螺离心机分离效果的因素包括悬浮液固形物含量、悬浮颗粒大小、离心力等。经过测定加热后蛋白液悬浮液固形物含量为1.8%,悬浮颗粒平均粒径为13.47μm,均符合卧螺离心机对悬浮液的要求。在此探讨进料量为4t/h,不同离心力条件(1200g、1500g、1800g、2100g、2400g)下,1吨蛋白沉淀悬浮液分离出蛋白粉数量的差异。表3显示卧螺离心机转速越高,分离所得甘薯蛋白粉越多,各处理间差异较为显著,当离心力达2400g时,4吨蛋白悬浮液可得蛋白粉13.59公斤。表3不同离心力下分离1吨悬浮液所得蛋白粉数量ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>实施例2、甘薯蛋白基本成分测定甘薯蛋白的制备:1、取甘薯淀粉加工企业所用品种“商薯98”100kg,清洗后以液料质量比为2∶1的比例进行打浆,提取淀粉,将提取淀粉后剩余的甘薯废液泵入卧螺离心机,在4000g离心力的作用下去除其中的薯渣及甘薯淀粉,得甘薯蛋白液约249.5kg,蛋白浓度为0.285%。2、采用比较常见且经济的板式换热器对去除淀粉和薯渣的蛋白液进行预热处理,预热后蛋白液的温度大约为50°C。3、蛋白液经板式换热器预热后被泵入储存罐中,然后经过高温蒸汽进行加热处理,3-5min内,蛋白液被加热到95°C左右,停止通入热蒸汽,蛋白受热变性,并随着温度降低蛋白逐渐絮凝,冷却至30°C左右时,进行离心处理。4、将冷却后的料液泵入卧螺离心机中,经过4000g的速度离心,絮凝的蛋白在离心力的作用下沉淀下来,并从卧螺离心机下方输出。5、取离心下来的甘薯蛋白利用鼓风干燥箱进行干燥,温度控制在55°C左右,控制水分含量在10%左右,粉碎后得到粗甘薯蛋白粉(图6),质量为0.84kg,纯度为60.49%,提取率为71.25%。蛋白质含量测定:称取0.20g提取的甘薯蛋白粉末放入消化管中,加浓硫酸(浓度98%)12ml,消化温度420°C,时间1.5小时,用凯氏定氮仪测定甘薯中蛋白质含量(瑞典Foss公司KIELTECxa0ANALYSISER凯氏定氮仪)。粗纤维测定:称取1.0g提取的甘薯蛋白粉放置在预干燥的坩埚里。用福斯特卡托公司2010半自动纤维分析仪,热浸提方法提取粗纤维,浸提结束后用水洗3遍,将样品转移到样品架上,在室温下放置到有机溶剂完全挥发,然后将样品放入100°C的烤箱中,烘烤10分钟,除去有机溶剂。再在130°C±2°C的烤箱中烘烤两小时。将坩埚置于干燥器中冷却到室温,称重精确到1.0g±0.002g。然后在525°C±10°C灰化样品,最少3小时。再将坩埚置于干燥器中冷却到室温,称重精确到1.0g±0.002g,计算粗纤维含量。ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>脂肪测定:称取1.0g提取的甘薯蛋白粉放置在洁净的纸套筒中,加入少量脱脂棉,在浸提烧杯中加80ml石油醚,用福斯特卡托公司Soxtecxa0Avantixa02050自动脂肪检测仪提取样品中脂肪。浸提结束后,取出提取杯,并将提取杯置于100°C干燥箱中30分钟,在干燥器中冷却再称重,计算脂肪含量。ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>水分测定:水分测定采用GBxa05009.3-2010。取洁净铝制称量瓶,置于101°C~105°C干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,加热1.0h,取出盖好,置干燥器内冷却0.5h,称量,并重复干燥至前后两次质量差不超过2mg,即为恒重。称取混合均匀甘薯蛋白粉3g~5g(精确至0.0001g),放称量瓶中,试样厚度不超过5mm,加盖,精密称量后,置101°C~105°C干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,干燥2h~4h后,盖好取出,放入干燥器内冷却0.5h后称量。然后再放入101°C~105°C干燥箱中干燥1h左右,取出,放入干燥器内冷却0.5h后再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过2mg,即为恒重。试样中的水分的含量按下式进行计算。X₁=100×(m₁-m₂)/(m₃-m₂)式中:X——试样中水分的含量,单位为克每百克(g/100g);m₁——称量瓶和试样的质量,单位为克(g);m₂——称量瓶和试样干燥后的质量,单位为克(g);m₃——称量瓶的质量,单位为克(g)。水分含量≥1g/100g时,计算结果保留三位有效数字;水分含量<1g/100g时,结果保留两位有效数字。注:两次恒重值在最后计算中,取最后一次的称量值。灰分测定:灰分测定参照GBxa05009.4-2010。取大小适宜的瓷坩埚置马弗炉中,在550°C±25°C下灼烧0.5h,冷却至200°C左右,取出,放入干燥器中冷却30min,准确称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重。然后,取3g~10g(精确至0.0001g)蛋白粉置于瓷坩埚中,先在电热板上以小火加热使样品充分炭化至无烟,然后置于马弗炉中,在550°C±25°C灼烧4h。冷却至200°C左右,取出,放入干燥器中冷却30min,称量前如发现灼烧残渣有炭粒时,应向试样中滴入少许水湿润,使结块松散,蒸干水分再次灼烧至无炭粒即表示灰化完全,方可称量。重复灼烧至前后两次称量相差不超过0.5mg为恒重。按下式计算。X₁=100×(m₁-m₂)/(m₃-m₂)X₁(测定时未加乙酸镁溶液)——试样中灰分的含量,单位为克每百克(g/100g);m₁——坩埚和灰分的质量,单位为克(g);m₂——坩埚的质量,单位为克(g);m₃——坩埚和试样的质量,单位为克(g)。试样中灰分含量≥10g/100g时,保留三位有效数字;试样中灰分含量<10g/100g时,保留二位有效数字。注:两次恒重值在最后计算中,取最后一次的称量值。淀粉含量的测定:采用GBTxa05009.9-2008测定蛋白粉中淀粉的含量。1)操作步骤称取2~5g样品,置于放有折叠滤纸的漏斗内,先用50ml乙醚分5次洗除脂肪,再用约100mlxa085%乙醇洗去可溶性糖类,将残留物移入250ml烧杯内,并用50ml水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内,将烧杯置沸水浴上加热15min,使淀粉糊化,冷却到60°C以下,加20ml淀粉酶溶液,在55~60°C保温1h,并不时搅拌(注:温度过高,淀粉酶的活性破坏)。然后取1滴此液加1滴碘溶液,应不显兰色,若显兰色,再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液,继续保温,直至加碘不显兰色为止。加热至沸,冷却后移入250ml容量瓶中,并加水至刻度,混匀,过滤。弃去初滤液,取50ml滤液,置于250ml锥形瓶中,加5mlxa06mol/L盐酸,装上回流冷凝器,在沸水浴中回流1h,冷后加2滴甲基红指示剂,用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100ml容量瓶中,洗涤锥形瓶,洗液并入100ml容量瓶中,加水至刻度,混匀备用。2)标准曲线的绘制按表4在各试管中分别加入不同体积1mg/ml葡萄糖标准溶液,并分别加蒸馏水补足3ml,分别在各试管中加入2ml斐林试剂,混合后试管口用玻璃球盖好,放入沸水浴加热15min取出后在流水中冷却,1500r/min离心5min,取上清液在590nm波长处进行比色测定,以蒸馏水作比色时的参比,读出各管的光密度值和空白管的光密度值,然后用空白管的光密度值分别减去各管的光密度值,并以此值作纵坐标;以各管含糖量作横坐标,绘制标准曲线,并计算其线性回归方程。表4吸光值结果ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>3)加酶量确定酶法测定淀粉先使用α-淀粉酶将淀粉水解成糊精和低聚糖,然后再使用淀粉葡糖苷酶将这些大分子物质水解成小分子的葡萄糖。取1g样品于三角瓶中,加入10ml蒸馏水,沸水浴中糊化10min。然后,分别加入0.5%的α-淀粉酶0.5ml,1.5ml,3.0ml,4.0ml,5.0ml;在摇床中60°C水浴中振荡1h后拿出后,滴加碘液,观察颜色变化。α-淀粉酶水解完全的样品,60°C继续加入0.5%的淀粉糖化酶反应1h后,取出加入95%的乙醇40ml,观察有无沉淀产生。若无沉淀产生,证明糖化酶已将糊精及低聚糖水解(成葡萄糖)完全。4)计算方法 X 1 = ( A 1 - A 2 ) × 0.9 m × V 1 V 2 × V 3 100 × 1000 × 100 % ]]>式中:X₁-样品中淀粉的含量,%;xa0xa0xa0xa0xa0xa0A₁-测定用样品中还原糖的含量,mg;A₂-试剂空白中还原糖的含量,mg;0.9-还原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数;m-称取样品质量,g;V₁-水解用样品溶液体积,ml;V₂-样品定容总体积,ml;V₃-测定用样品处理液的体积,ml。可溶性糖含量的测定:参考GB/Txa06194-86测定蛋白粉中可溶性糖的含量。(一)试剂配制1.费林试剂甲:称取硫酸铜(CuSO₄·H₂O,分析纯)34.6g溶于水中,稀释至500mL,过滤,贮于棕色瓶内。2.费林试剂乙:称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠(KNaC₄O₆H₄·H₂O,分析纯)138g溶于水中,稀释至500mL,用石棉垫漏斗抽滤。3.转化糖标准溶液:称取9.5g蔗糖(分析纯)用水溶解后转入1000mL容量瓶中,加入6mol/Lxa0HCl(分析纯)10mL,加水至100mL。在20~25°C下放置三天或在25°C保温24h,然后用水定容(此为酸化的1%转化糖液,可保存3~4个月)。测定时,取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中,加入甲基红指示剂一滴,用1mol/LNaOH溶液中和后用水定容,即为1mg/mL转化糖标准溶液。4.亚甲基蓝溶液:称取0.5g亚甲基蓝(分析纯)溶于10mL水中。5.乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)2·H₂O,分析纯]溶于水中,加冰乙酸3mL稀释至100mL。6.亚铁氰化钾溶液:称取10.6g亚铁氰化钾[K₄Fe(CN)6·H₂O,分析纯]溶于水,稀释至100mL。(二)样品提取液制备取待测样品10g加入190ml的水,搅匀。称取匀浆25.0g或50.0g(相当于取干样品1.25g或2.50g)放入150mL烧杯中,用水将样液全部转入250mL容量瓶中,并调整体积约为200mL。置80±2°C水浴保温30min,期间摇动数次,取出加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各2~5mL,冷却至室温后,用水定容,过滤备用。取已经制备的待测液100mL于200mL容量瓶中,加6mol/Lxa0HClxa010mL。在80±2°C水浴加热10min,放入冷水槽中冷却后,加甲基红指示剂二滴用6mol/L及1mol/Lxa0NaOH溶液中和,用水定容。(三)可溶性总糖测定1.费林试剂的标定:取费林试剂甲、乙各5.00mL或在测定前先等体积混合后取10.00mL混合液于250mL锥形瓶中,放入玻璃珠4~5粒,先加入比预测(预测见2)仅少0.5mL的1mg/mL转化糖标准液。将此混合液置1000W电炉上加热,使其在2min左右沸腾,准确煮沸2min,此时不离开电炉,立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂2~3滴,并继续以每4~5s的滴速滴加标准糖液,直至二价铜离子完全被还原生成砖红色氧化亚铜沉淀,溶液蓝色褪尽为终点。用准确滴定标准糖液的毫升数V₁,乘以标准糖液浓度[mg/mL],即得10mL费林试剂所相当的糖的毫克数。2.预测:取费林试剂甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液于250mL锥形瓶中,由滴定管加入待测糖液约15mL,在电炉上加热至沸腾,约沸腾15S后迅速滴加待测糖液,至呈现极轻微的蓝色为止,此时加入0.5%亚甲基蓝指示剂2~3滴,继续滴加待测糖液,直至溶液蓝色褪尽为止,记下待测糖液的用量V₂(毫升数)。3.准确测定:取费林试剂甲、乙各5.00mL或10.00mL混合液加入锥形瓶中,由滴定管加入比预测仅少0.5mL的待测糖液,并补加V₁-V₂毫升水(标准费林试剂所消耗的标准糖液毫升数V₁减去预测消耗的待测糖液毫升数V₂,即为应补加水的毫升数),使其与标定费林试剂时的反应体积一致。以下按费林试剂标定同样操作,继续滴至终点。前后沸腾时间须在3min分钟左右。待测糖液消耗量应控制在15~50mL范围内,不能大于标定费林试剂所用标准糖液体积V₁,否则应增减称样量重新制备待测液。同法平行操作3次,取平均值。(四)结果计算可溶性总糖(%,以转化糖计)=(G/V)×(A/W)×(250/1000)×100式中:W——样品称重(g)xa0xa0xa0xa0xa0xa0G——10mL费林试剂相当的转化糖(mg)xa0xa0xa0xa0xa0xa0V——准确滴定时所用待测液的体积(mL)xa0xa0xa0xa0xa0xa0A——稀释倍数xa0xa0xa0xa0xa0xa0250——定容体积(mL)xa0xa0xa0xa0xa0xa01000——由毫克换算为克表5提取的甘薯蛋白粉成分表ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>